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稳定检测细胞系长沙艾科博生物科技有限公司实验设计和外包

来源:365bet比分直播 | 发布时间:2019-10-09

引入稳定的细胞系检测服务:常规转染技术分为两类:瞬时转染和稳定转染(永久性转染)。
尽管旧的外源DNA / RNA未整合到宿主染色体中并且可以实现高水平的表达,但它通常仅持续几天。
分析结果通常在转染后24至72小时内使用(取决于一些构建体),并且经常使用诸如荧光蛋白和β-半乳糖苷酶的通知系统。检测。
后者也称为稳定转染,无关质粒DNA整合到宿主细胞染色体中,使宿主细胞能够长时间表达靶基因和蛋白质。
应该在瞬时转染的基础上检查靶细胞,或者应该以高转染效率应用病毒。
为了建立稳定的细胞系,选择靶细胞,并根据不同基因载体中包含的抗性标记选择相应的药物。最常用的真核表达基因载体是潮霉素和新真菌。它通常用于筛选新霉素,G418。
通过选择获得的细胞可以稳定地表达靶蛋白,可以用于蛋白质的扩增和浓缩,或者可以获得稳定建立特定基因的细胞系。
服务说明:Vector Construction Service也可用于稳定检测额外构建的质粒DNA。
对于质粒DNA抗性标记,选择相应的药物,并对待分析的细胞进行药物测试,如果所有细胞都是凋亡的,则选择最低浓度的药物。
瞬时转染后,在该浓度下进行选择。
10-14天后,挑选并扩增单克隆抗体,RT-PCR或客户提供对靶基因特异的抗体,WesternBlot用于根据蛋白质表达检测稳定的细胞系。
服务流程图1.客户提供成功构建载体质粒和与载体相关的其他遗传信息,提供细胞系或原代细胞,PCR引物或抗体。2.根据您的信息构建载体或提取并纯化质粒。在实验转染或需要稳定细胞旋转,细胞培养和药物检测,RT-PCR检测或Western blot 3之后,为客户提供成功的质粒和甘油构建及详细信息。选择新鲜产品瓶成功稳定细胞系和相应的对照细胞系。完整的实验报告,包括原始数据和实验过程设备方法的图像。
实验步骤:* 1,构建细胞培养载体或提取质粒。* 2:在瞬时转染和细胞浓度检测之前进行实验。* 3:筛选转染,收集和培养单克隆细胞。*同时检查4种引物抗体浓度的条件。* 5.蛋白质印迹和/或RT-PCR检测。* 6,数据收集和结果分析。
服务价格和持续时间:根据具体情况协商。